医学生从理论行进至临床检验的关键一步存有医学微生物学实验二 , 该阶段一般囊括细菌的分离培养 , 还有革兰染色 , 生化鉴定以及药敏试验等核心操作 , 其每一项均与后续诊断的精准程度直接相关联 , 不少同学于实验课之际易于手忙脚乱 , 并非源于知识点具备难度 , 而是操作细节未领会透彻 , 此篇文章会将实验二里极易出错的环节剖析明白。
革兰染色为什么总是染成粉色
在微生物实验当中, 最基础且最考验手法的操作便是革兰染色。倘若染出来的结果出现差错, 那么后续所有的鉴定步骤都会付诸东流。其中较为常见的问题体现为, 本应被染成紫形下的阳性菌却转变成为了红色, 又或者是阴性菌所呈现出的颜色过深, 致使人们无法清晰地分辨开来。
现象大多源于脱色此环节 , 脱色用时过久 , 结晶紫同碘液建构之机复合物因酒精而漂洗 , 以至于阳性细菌会展示出假阴性存在。脱色耗时短促 , 阴性菌之红色为紫色所覆盖 , 便会出现假阳性情况。脱色时间应把控于十五至二十秒范畴 , 肉眼察觉紫色开始变淡之际即刻借用水冲刷停顿 , 上述火候需预先于废弃玻片之上练习多次。
存在一个易于被忽视的细节是涂片的厚度, 菌液涂抹得太厚, 染色之际颜色会出现堆积, 脱色液无法渗透进去，最终结果将会糟糕至极, 涂片需要又薄且均匀, 如同于水面上轻轻拖曳一层膜, 透过涂片能够隐隐约约看到报纸上的字方算合格, 此外火焰固定之时温度过高会将菌体烧得变形, 从而影响着色效果, 玻片在酒精灯上来回经过三次便足矣, 不要停留。
细菌分离培养长不出单菌落怎么办
让单个细菌成长为独立菌落, 以此作为分离培养的目的, 从而便于后续挑取纯种。不少同学在完成实验后发觉, 平板上要么长成了一片, 要么干脆未曾生长出任何东西来, 这大多是接种环以及划线手法方面存在的问题。
划线接种之际, 接种环需冷却至不烫手方可去沾菌液, 不然细菌会直接被烫死。每划完一个区域, 要转动平板约60度, 将接种环在火焰上烧红灭菌, 冷却后再从上一区域的末端起始划。四区划线法的关键在于每个区之间都得烧环, 如此方可使菌落密度逐级递减, 最终于第四区获得孤立菌落。
培养基所处状态同样相当关键, 平板倾倒完成之后, 要是其表面存有冷凝水, 那么在进行划线操作时, 菌液将会被水冲散开, 如此一来单菌落便根本无法达成。应于倾倒平板之时, 先将培养基冷却至大约50度, 完全倒完之后, 把盖子盖上并晾晒片刻, 随后将平板倒置而后放入培养箱。采取倒置方式培养, 既能防止冷凝水出现滴落现象, 也能够促使菌落表面保持干燥, 使其菌落形态更为典型。要是在进行48小时培养之后, 依旧未见有菌生长, 应检查思索一下培养箱温度是否未达到37度, 又或是培养基灭菌环节产生了问题。
药敏试验结果判读容易踩的坑
针对实验二而言, 药敏试验属于其中具备临床意义的部分, 且是最具临床意义的那部分, 细菌对于哪种抗生素敏感, 直接由抑菌圈的大小来决定。在进行判读结果这个操作的时候, 量取抑菌圈直径所用的工具是游标卡尺, 测量是从背面进行, 并且测量时要避开菌落蔓延的区域。
抑菌圈的边缘并非模糊的渐变带, 而是肉眼能够看见的清晰边界, 要是有细小菌落生长在抑菌圈内, 那就表明细菌已然产生耐药突变, 不能算作敏感, 测量的时候每块平板最少要量三个方向并求取平均值, 可以减少误差, 另外, MH培养基的厚度及其琼脂浓度会对抗生素扩散速度产生影响, 铺板的时候厚度把控在4毫米左右, 要是太厚抑菌圈就会偏小, 要是太薄抑菌圈又会偏大。
另外有一点极易被忽略, 那便是药敏纸片的保存情况。要是纸片受潮或者过期了, 那么抗生素效价就会下降, 进而抑菌圈会异常偏小不利于特定检测结论, 并且很有可能影响后续的分析以及判断了！使用之前得检查纸片是不是干燥的状态, 开封之后要放置在装有干燥剂的密封罐当中, 是须冷藏予以保存。从这儿取出之后还得在室温环境下回温15分钟才可以贴到平板之上。
用于实验二的每一项操作, 并非是孤立存在的技术动作, 而是相互串联以后, 构成了一整套完整的微生物鉴定流程。通过染色来观察形态, 借助培养去查看生长情况, 依据药敏来判断疗效, 其中任何一个步骤要是出现疏忽, 都会致使实验结果出现偏差, 变得不真实。相较于反复去看书而言, 花费更多时间在操作细节方面, 反而会更有效果, 更加管用。
